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hESC(H1)人胚胎干細胞(STR鑒定正確)

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企業檔案

企業類型:生產商

公司地址:廈門火炬高新區(翔安)產業區翔星路88號臺灣科技企業育成中心E205L室

主營產品:【主營供貨】細胞類主營有科研細胞系、標記細胞、耐藥細胞、原代細胞,試劑類產品有細胞培養基、血清、無血清細胞凍存液、雙抗、胰酶、PBS、【主營檢測服務】STR鑒定、原代細胞定制、細胞永生化、標記細胞定制、細胞實驗、課題服務

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產品簡介

貨號:IM-H522

規格:1x106cells/T25或1mL凍存管 形態:球形克隆,貼壁生長

培養基:H1人胚胎干細胞完全培養基

傳代比例:1:2至1:3,每周 2-3次

詳細內容

公司簡介

 
  一、細胞基本屬性
細胞名稱 hESC(H1)人胚胎干細胞(STR鑒定正確)
細胞別稱 H1;人胚胎干細胞;WA01
種屬來源 人/男性
組織年齡 內細胞團
生長特性 貼壁生長
細胞形態 球形克隆
背景簡介 hESC(H1)細胞株來源于健康男性內細胞團,貼壁生長,呈克隆狀,可在hESC/iPSC完全培養基中快速增殖,而邊緣分化的細胞則在該培養基中生長較慢,從而選擇性擴增并獲得高純度人多能干細胞。包裝規格為1mL凍存管,含量為>1x106個/mL,且支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性。
細胞代數 10代以內 
STR鑒定結果 Amelogenim:X  Y;D5S818:9,11;D13S317:8,11;D7S820:8,12;D16S539:9,13;vWA:15,17;THO1:9.3,13;TPOX:8,18;CSF1PO:12,13
細胞熒光檢測

3.jpg

人胚胎干細胞 H1(ESC H1)培養鑒定實驗報告下載

細胞規格 1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測
培養基 H1人胚胎干細胞完全培養基
凍存條件 無血清凍存液,液氮儲存
細胞貨期 現貨,1周左右
發貨方式 復蘇發貨(免運輸費用)/  凍存發貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞
供應限制 僅限于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
特別說明 以下細胞培養凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品說明書為主
  二、細胞培養操作
試劑準備 1)hESC/iPSC完全培養基配制(500 mL)
1.在4℃條件下解凍hESC/iPSC Grouth Supplements A/B,勿在37℃培養箱/水浴鍋解凍。
2. 參考表1在生物安全柜中,使用無菌移液管混勻下列成分配制成hESC/iPSC完全培養基,之后置于4℃儲存,封口膜封好后2周內使用。

3. 有初培養需擴建的需求,建議先配置100 mL,保證2周內使用完畢。

hESC/iPSC完全培養基配置說明

2)Matrigel鋪板(以貨號為354277的Corning® Matrigel®包被6孔板為例)
A. 分裝 Matrigel
1.貨號354277的Matrigel,操作說明中不標注蛋白濃度,而是以Dilution Factor表示,如某批次的Dilution Factor為278 μL,則表明278 μL可包被4塊6孔板,分裝數量=5 mL /0.278=17.98。
2. 準備18個無菌1.5 mL EP管,標記Matrigel日期、操作人;1mL無菌吸頭;EP管架,均置于-20℃冰箱中預冷1小時。
3. 將Matrigel放置4℃冰箱過夜解凍,當Matrigel完全解凍即可開始分裝。 注:在解凍時,將Matrigel放置冰箱內側角落,切勿放在靠近冰箱門附近。
4.準備一個裝滿碎冰的冰盒,將解凍過的Matrigel、預冷的1.5 mL EP管及EP管架、1mL吸頭放置于生物安全柜上。
5.混勻Matrigel,無菌分裝于各個1.5 mL EP管中,并置于冰上。當吸頭被堵塞可能導致分裝體積不準時需要更換吸頭。
6. 將分裝后的 Matrigel 置于-20℃冰箱中保存。
B.鋪板
1.取36 mL冷藏DMEM/F12于50 mL離心管中,準備4個6孔板,標記Matrigel、批號、日期和操作人。
2.1 mL無菌吸頭置于-20℃冰箱中預冷1小時,取出一支冷凍的Matrigel(5mL)置于4℃冰箱解凍至完全化凍。
3.準備一個裝滿碎冰的冰盒,將解凍過的Matrigel、預冷的1mL吸頭放置于生物安全柜上。
4.用預冷吸頭向解凍過的Matrigel(5mL)加入1 mL冷的DMEM/F12并反復吹打解凍混勻。
5.吸出已解凍混勻的Matrigel加入離心管中剩余的DMEM/F12,使用10 mL移液管再次反復吹打混勻。
6.分裝1.5 mL/孔于4個六孔板中,輕輕搖晃混勻。
7. 培養板置于室溫1小時后即可使用,或置于4℃冷藏過夜,兩周內使用。
復蘇方法 1)復蘇hESC/iPSC(以6孔板為例)
1. 將水浴鍋預熱至37℃;并將Matrigel包被的6孔板,提前放置生物安全柜中約1小時恢復至室溫(15~30℃)。
2. 取4 mL hESC/iPSC完全培養基,按照1:4000比例加入1 μL的hESC/iPSC Supplement C,恢復至室溫(15~30℃)。
注意:不要在37℃水浴鍋中預溫培養基。
3. 取出1支冷凍的細胞置于37℃水浴鍋手持輕輕搖晃,2 min內解凍,肉眼觀察細胞懸液內冰晶即將完全消失時取出。
4. 75%酒精無塵紙擦拭凍存管表面,轉入生物安全柜;將細胞懸液移到事先準備好的15 mL 離心管中,隨后緩慢逐滴加入10mL DMEM/F12,過程中輕柔晃動混勻細胞,160g離心5 min。
5. 吸棄上清,加入預溫的4 mL的hESC/iPSC完全培養基+hESC/iPSC Supplement C制備細胞懸液,盡量避免吹打。
注:可留20 μL上清液,輕彈管底,使細胞懸浮液更均勻,避免成較大細胞團。
6. 吸除6孔板中2孔的Matrigel包被液,將細胞懸液按照2 mL/孔接種到1個孔中。
7. 水平十字搖勻三次,置于37℃,5% CO2濃度,飽和濕度的培養箱中,再次水平十字搖勻三次培養。
8. 18-24小時后換新的hESC/iPSC完全培養基,之后每天更換培養基。

注:在hESC(H1)培養過程中,如果細胞的匯合度超過50%,建議更換培養基時,培養基的體積增加至3-4mL/孔。

hESC/iPSC傳代&培養操作試劑用量

傳代方法 傳代hESC/iPSC(以6孔板為例)
1. 傳代條件:① 細胞匯合度達85%左右(如圖1(C-D)所示),一般情況下每3-4天傳代;
② 細胞匯合度較低,生長密度分布不均勻。
注:即使克隆團較小、匯合度不足,也建議不要連續培養超過5天。
2.傳代比例:可根據細胞生長狀態和實驗需要按1:5~1:12的比例進行傳代,如果細胞正常,克隆團匯合度85%,大小均勻(如圖1(C-D)所示),建議按照1:8進行傳代,如果密度偏低,則可降低傳代比例;密度偏高,則增加傳代比例。
注:1:8傳代就是1個孔瓶傳8個孔(以6孔板為例)。
3. 將 Matrigel 包被的6孔板,提前放置生物安全柜中約1小時恢復至室溫(~25℃)。
4. 根據傳代接種的孔數準備2 mL/孔的hESC/iPSC完全培養基,并按1:4000比例加入hESC/iPSC Supplement C,恢復至室溫(~25℃)。
5. 將 Matrigel 包被的6孔板,提前放置生物安全柜中約1小時恢復至室溫(~25℃)。
6. 根據傳代接種的孔數準備2 mL/孔的hESC/iPSC完全培養基,并按1:4000比例加入hESC/iPSC Supplement C,恢復至室溫(~25℃)。
7. 將孔內培養基吸取,加入2 mL/孔的DPBS(不含鈣鎂),輕輕搖晃并吸取。
8. 加入2 mL/孔的 hESC/iPSC Passage Solution使溶液完全覆蓋孔底。
9. 置于37℃培養箱中孵育8-9 min。
注:① 消化8-9 min后鏡下觀察細胞變化,當大部分細胞變亮變圓,且細胞尚未脫離基質或漂起時即可終止消化,若大部分細胞仍未變亮,則需要延長消化時間;
② 保持6孔板與培養箱金屬隔板直接接觸,使6孔板受熱均勻,不要疊放。

1.jpg

10. 消化結束后輕輕地將細胞培養板拿回生物安全柜,避免震蕩搖晃細胞,傾斜并吸除hESC/iPSC Passage Solution。
11. 及時加入2 mL/孔預溫的hESC/iPSC完全培養基+ hESC/iPSC Supplement C,水平十字搖晃6孔板使細胞脫離基質。
注:① 加hESC/iPSC完全培養基 + hESC/iPSC Supplement C時,可輕柔吹打細胞1-2次,不能超過2次,避免反復吹打;有部分細胞(10%~15%)未脫離基質是正,F象,若有大量細胞未脫離則需延長消化時間(< 10min)。

2.jpg

②hESC(H1)細胞不能長時間處于hESC/iPSC Passage Solution(<15 min),所以收集接種細胞時操作必須快速,以及一次操作不要超過4孔(六孔板)。
12. 吸取6孔板中的Matrigel溶液,加入預溫的hESC/iPSC完全培養基+ hESC/iPSC Supplement C 2 mL/孔。
13. 在6孔板上標記細胞名稱、代次、傳代比例、日期、操作人。將步驟9獲得的細胞懸液輕輕搖勻,按預先設定的傳代比例均勻分配于孔板中。 注:為了鋪板均勻并降低對細胞的損傷,可以將步驟9獲得的細胞懸液收集至2mL離心管,輕柔顛倒混勻細胞1-2次;再按照傳代比例接種。
14. 接種后,水平十字搖勻6孔板三次,置于37℃,5% CO2濃度,飽和濕度的培養箱中, 再次水平十字搖勻6孔板三次,培養過夜。
15. 18-24小時后更換新hESC/iPSC完全培養基,此后每天換液,4-5天后繼續傳代/凍存。
注意事項
 1.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 
2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正,F象。
1.收貨時若發現干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存;
2.為保證細胞的高存活率,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞。
到貨須知
1.收到細胞后,及時拍照記錄有無漏液、渾濁或瓶身破損現象。
2.靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。
3.由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。         4.  仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。
備注:客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以撥打技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答。

關鍵詞:hESC(H1)人胚胎干細胞(STR鑒定正確)  

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